分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
操作方法：
接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热 10 分钟。
将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档。
根据所需波长转动波长选择钮。
将空白液及测定液分别倒入比色杯 3/4 处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。
在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向 t=0 处。
盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的 t=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。
比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。
三大注意事项：
分光光度计应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定。
分光光度计使用前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固，通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。
分光光度计在仪器尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上，若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。
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